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犢牛前胸腺素α基因克隆與表達
時間:2007-12-21 11:28:48 來源: 作者:
在人類疾病治療中,本產品可用于系統性紅斑狼瘡、乙型、丙型肝炎、非典型肺炎等病毒性疾病、免疫缺陷病、癌癥、男女不育、艾滋病、心血管和神經疾病的治療。該藥物還可用于某些動物疾病的治療,如雞傳染性貧血、腺病毒病、禽流感、傳染性法式囊病、大腸桿菌病、沙門氏菌病等。
目前,國內外主要采用動物組織,如從動物胸腺提取方法制備胸腺素。此外,也有采用尊龍凱時 - 人生就是搏!合成法生產胸腺素α1的報道。市場所售的胸腺素成本高、產量低、價格昂貴。本技術是利用基因工程法生產胸腺素的一種創新技術,即,將犢牛前胸腺素基因克隆到細菌的基因組中,通過重組工程菌的發酵液來生產前胸腺素α,生產工藝主要涉及細菌發酵,蛋白提取純化等,工藝路線簡單,可以工業化生產。生產成本大幅降低。
課題組先后開展了“犢牛前胸腺素-α(ProT-α)基因mRNA的克隆和鑒定”、真核和原核基因重組工程菌等研究工作,取得了如下結果:
(1)完成“犢牛前胸腺素-α基因mRNA的克隆和鑒定”,獲得了犢牛ProT-αmRNA基因的cDNA片段,其由1039個核苷酸(nt)組成,前胸腺素α編碼框長330nt,編碼109個氨基酸殘基的多肽。
(2)完成“真核表達載體和重組工程菌的構建和鑒定”,獲得犢牛前胸腺素-α基因重組酵母菌株,搖瓶表達量達到30mg•L-1。
(3)完成“原核表達載體和重組工程菌的構建和鑒定”,獲得大腸桿菌重組工程菌,表達產物“GST-ProT-α融合蛋白”分子量約為38KD,ProT-α約為12KD。產物純度達到96%以上。搖瓶表達量約為161mg•L-1。
(4)開展了“GST-ProT-
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