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成果轉化

前胸腺素基因重組質粒構建和表達產物定性定量

時間:2023-07-19 11:07:49  來源:  作者:
    在人類疾病治療中,本產品可用于系統性紅斑狼瘡、乙型、丙型肝炎、非典型肺炎等病毒性疾病、免疫缺陷病、癌癥、男女不育、艾滋病、心血管和神經疾病的治療。該藥物還可用于某些動物疾病的治療,如雞傳染性貧血、腺病毒病、禽流感、傳染性法式囊病、大腸桿菌病、沙門氏菌病等。
    目前,國內外主要采用動物組織,如從動物胸腺提取方法制備胸腺素。此外,也有采用尊龍凱時 - 人生就是搏!合成法生產胸腺素α1的報道。市場所售的胸腺素成本高、產量低、價格昂貴。本技術是利用基因工程法生產胸腺素的一種創新技術,即,將牛前胸腺素基因克隆到細菌的基因組中,通過重組工程菌的發酵液來生產前胸腺素α,生產工藝主要涉及細菌發酵,蛋白提取純化等,工藝路線簡單,可以工業化生產。生產成本大幅降低。
    課題組先后開展了“牛前胸腺素-α(ProT-α)基因的克隆和鑒定”、真核和原核基因重組工程菌等研究工作,取得了如下結果: 
開展了犢牛前胸腺素-α(ProT-α)基因的克隆和鑒定等研究,獲得了犢牛ProT-α的cDNA基因,該基因由1039bp組成,已提交GenBank數據庫(注冊號:DQ333385);構建了犢牛ProT-α基因重組酵母菌株,搖瓶表達量達到30mg•L-1;構建了大腸桿菌重組工程菌,對表達產物進行了定性和定量鑒定,結果表明ProT-α重組蛋白分子量約為38KD,搖瓶表達量約為161mg•L-1,純化后產物純度達到96%以上。
    三、對重組大腸桿菌發酵工藝進行了系統研究,ProT-α重組蛋白工程菌發酵條件經優化,50L發酵罐菌體干重達34g•L-1,重組蛋白表達量占菌體干重的26%,初步達到工業化生產的技術要求。
四、基因表達產物活性測定表明,該融合蛋白可顯著增加小鼠NK細胞和脾細胞的活性,與市售意大利人工合成產品(日達仙)比較,具有基本一致的尊龍凱時 - 人生就是搏!活性水平。
    五、本項目已申請國家發明專利一項(專利申請號:200410035736.9),發表研究論文4篇。
    本項目于2006年12月通過山東省科技廳組織的成果鑒定,該研究成果達到了國際同類研究的先進水平。
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